Wieħed mill-vantaġġi ewlenin tal-kultura taċ-ċelluli huwa l-abbiltà li timmanipula l-kimika fiżika tar-riproduzzjoni taċ-ċelluli (jiġifieri temperatura, pH, pressjoni osmotika, tensjoni O2 u CO2) u ambjent fiżjoloġiku (jiġifieri konċentrazzjoni ta 'ormoni u nutrijenti).Minbarra t-temperatura, l-ambjent tal-kultura huwa kkontrollat mill-mezz tat-tkabbir.
Għalkemm l-ambjent fiżjoloġiku tal-kultura mhuwiex ċar daqs l-ambjent fiżiku u kimiku tiegħu, fehim aħjar tal-komponenti tas-serum, identifikazzjoni tal-fatturi tat-tkabbir meħtieġa għall-proliferazzjoni, u fehim aħjar tal-mikroambjent taċ-ċelloli fil-kultura.(Ie interazzjoni ċellula-ċellula, diffużjoni tal-gass, interazzjoni mal-matriċi) issa tippermetti li ċerti linji taċ-ċelluli jiġu kkultivati f'midja ħielsa mis-serum.
1.L-ambjent tal-kultura jaffettwa t-tkabbir taċ-ċelluli
Jekk jogħġbok innota li l-kundizzjonijiet tal-kultura taċ-ċelluli huma differenti għal kull tip ta 'ċellula.
Il-konsegwenzi tad-devjazzjoni mill-kundizzjonijiet tal-kultura meħtieġa għal tip ta 'ċellula partikolari jvarjaw mill-espressjoni ta' fenotipi anormali sal-falliment sħiħ tal-kultura taċ-ċelluli.Għalhekk, nirrakkomandaw li ssir familjari mal-linja taċ-ċelluli li inti interessat fiha u ssegwi b'mod strett l-istruzzjonijiet ipprovduti għal kull prodott li tuża fl-esperiment tiegħek.
2.Prekawzjonijiet għall-ħolqien ta 'ambjent ottimizzat ta' kultura taċ-ċelluli għaċ-ċelloli tiegħek:
Media tal-kultura u serum (ara hawn taħt għal aktar informazzjoni)
Livelli ta' pH u CO2 (ara hawn taħt għal aktar informazzjoni)
Ikkultiva l-plastik (ara hawn taħt għal aktar informazzjoni)
Temperatura (ara hawn taħt għal aktar informazzjoni)
2.1 Midja Kulturali u Serum
Il-mezz tal-kultura huwa l-aktar parti importanti tal-ambjent tal-kultura, minħabba li jipprovdi n-nutrijenti, il-fatturi tat-tkabbir u l-ormoni meħtieġa għat-tkabbir taċ-ċelluli, u jirregola l-pH u l-pressjoni osmotika tal-kultura.
Għalkemm l-esperimenti inizjali tal-kultura taċ-ċelluli twettqu bl-użu ta 'midja naturali miksuba minn estratti tat-tessuti u fluwidi tal-ġisem, il-ħtieġa għal standardizzazzjoni, kwalità tal-midja, u domanda akbar wasslu għall-iżvilupp ta' midja definittiva.It-tliet tipi bażiċi ta 'midja huma midja bażali, midja mnaqqsa tas-serum u midja mingħajr serum, u għandhom rekwiżiti differenti għas-supplimentazzjoni tas-serum.
2.1.1 Medju bażiku
Medju tal-kultura taċ-ċelluli Gibco
Il-biċċa l-kbira tal-linji taċ-ċelluli jikbru sew f'midja bażika li fiha aċidi amminiċi, vitamini, melħ inorganiku, u sorsi tal-karbonju (bħal glukożju), iżda dawn il-formulazzjonijiet bażiċi tal-midja għandhom jiġu supplimentati bis-serum.
2.1.2 Medja tas-serum imnaqqas
Flixkun b'Gibco Low Serum Medium
Strateġija oħra biex jitnaqqsu l-effetti avversi tas-serum fl-esperimenti tal-kultura taċ-ċelluli hija li tuża midja mnaqqsa fis-serum.Il-medju tas-serum imnaqqas huwa formula medja bażika rikka f'nutrijenti u fatturi derivati mill-annimali, li jistgħu jnaqqsu l-ammont ta 'serum meħtieġ.
2.1.3 Medju mingħajr serum
Flixkun b'mezz Gibco mingħajr serum
Medju mingħajr serum (SFM) jevita l-użu tas-serum tal-annimali billi jissostitwixxi s-serum b'formulazzjonijiet xierqa ta' nutrizzjoni u ormoni.Ħafna kulturi primarji u linji taċ-ċelluli għandhom formulazzjonijiet medji mingħajr serum, inkluża l-linja ta 'produzzjoni ta' proteina rikombinanti tal-Ovarju tal-Ħamster Ċiniż (CHO), diversi linji ta 'ċelluli ta' hybridoma, linji ta 'insetti Sf9 u Sf21 (Spodoptera frugiperda), kif ukoll għal L-ospitanti għall-produzzjoni tal-virus (pereżempju, 293, VERO, MDCK, MDBK), eċċ. Wieħed mill-vantaġġi ewlenin tal-użu ta 'medja mingħajr serum hija l-abbiltà li tagħmel il-mezz selettiv għal tipi speċifiċi ta' ċelluli billi tagħżel taħlita xierqa ta 'fatturi ta' tkabbir.It-tabella li ġejja telenka l-vantaġġi u l-iżvantaġġi tal-midja mingħajr serum.
Vantaġġ
Żid iċ-ċarezza
Prestazzjoni aktar konsistenti
Purifikazzjoni aktar faċli u proċessar downstream
Evalwa b'mod preċiż il-funzjoni taċ-ċelluli
Iżżid il-produttività
Kontroll aħjar tar-reazzjonijiet fiżjoloġiċi
Sejbien tal-midja taċ-ċelluli mtejba
Żvantaġġ
Rekwiżiti ta' formula medja speċifika tat-tip taċ-ċellula
Jeħtieġ purità ogħla tar-reaġent
Tnaqqis fit-tkabbir
2.2.1 livell tal-pH
Il-biċċa l-kbira tal-linji taċ-ċelluli tal-mammiferi normali jikbru sew f'pH 7.4, u d-differenzi bejn il-linji taċ-ċelluli differenti huma żgħar.Madankollu, xi linji taċ-ċelluli trasformati intwerew li jikbru aħjar f'ambjent kemmxejn aċiduż (pH 7.0 - 7.4), filwaqt li xi linji taċ-ċelluli fibroblast normali jippreferu ambjent kemmxejn alkalin (pH 7.4 - 7.7).Linji taċ-ċelluli tal-insetti bħal Sf9 u Sf21 jikbru l-aħjar f'pH 6.2.
2.2.2 Livell tas-CO2
Il-mezz tat-tkabbir jikkontrolla l-pH tal-kultura u jibferja ċ-ċelloli fil-kultura biex jirreżistu l-bidliet fil-pH.Normalment, dan il-buffering jinkiseb billi jkun fih buffers organiċi (pereżempju, HEPES) jew ibbażati fuq il-bikarbonat tas-CO2.Minħabba li l-pH tal-medju jiddependi fuq il-bilanċ delikat tad-dijossidu tal-karbonju maħlul (CO2) u l-bikarbonat (HCO3-), il-bidliet fis-CO2 atmosferiku jibdlu l-pH tal-medju.Għalhekk, meta tuża medium buffered b'buffer ibbażat fuq il-bikarbonat CO2, huwa meħtieġ li tuża CO2 eżoġenu, speċjalment meta tikkultura ċelluli f'platti ta 'kultura miftuħa jew tikkultura linji taċ-ċelluli trasformati f'konċentrazzjonijiet għoljin.Għalkemm il-biċċa l-kbira tar-riċerkaturi normalment jużaw 5-7% CO2 fl-arja, ħafna mill-esperimenti tal-kultura taċ-ċelluli normalment jużaw 4-10% CO2.Madankollu, kull mezz għandu tensjoni CO2 rakkomandata u konċentrazzjoni ta 'bikarbonat biex tikseb il-pH korretta u l-pressjoni osmotika;għal aktar informazzjoni, jekk jogħġbok irreferi għall-istruzzjonijiet tal-manifattur tal-mezz.
2.3 Il-kultivazzjoni tal-plastiks
Il-plastiks tal-kultura taċ-ċelluli huma disponibbli f'varjetà ta 'forom, daqsijiet u uċuħ biex ikunu adattati għal diversi applikazzjonijiet tal-kultura taċ-ċelluli.Uża l-gwida tal-wiċċ tal-plastik tal-kultura taċ-ċelluli u l-gwida tal-kontenitur tal-kultura taċ-ċelluli hawn taħt biex tgħinek tagħżel il-plastik it-tajjeb għall-applikazzjoni tal-kultura taċ-ċelluli tiegħek.
Ara l-plastiks kollha tal-kultura taċ-ċelluli Thermo Scientific Nunc (link tar-reklamar)
2.4 Temperatura
It-temperatura ottima għall-kultura taċ-ċelluli tiddependi fil-biċċa l-kbira mit-temperatura tal-ġisem tal-ospitant li minnha huma iżolati ċ-ċelloli, u sa ċertu punt fuq il-bidliet anatomiċi fit-temperatura (pereżempju, it-temperatura tal-ġilda tista 'tkun aktar baxxa minn dik tal-muskolu skeletriku ).Għall-kultura taċ-ċelluli, Is-sħana żejda hija problema aktar serja minn sħana żejda.Għalhekk, it-temperatura fl-inkubatur hija ġeneralment stabbilita kemmxejn taħt it-temperatura ottima.
2.4.1 Temperatura ottima għal diversi linji taċ-ċelluli
Il-biċċa l-kbira tal-linji taċ-ċelluli tal-bniedem u tal-mammiferi jinżammu f'36°C sa 37°C għal tkabbir ottimali.
Iċ-ċelloli tal-insetti huma kkultivati f'27 ° C għal tkabbir ottimali;jikbru aktar bil-mod f'temperaturi aktar baxxi u temperaturi bejn 27°C u 30°C.Il fuq minn 30 ° C, il-vitalità taċ-ċelloli tal-insetti tonqos, anke jekk terġa 'lura għal 27 °C, iċ-ċelloli mhux se jirkupraw.
Linji taċ-ċelluli tat-tjur jeħtieġu 38.5 ° C biex jilħqu t-tkabbir massimu.Għalkemm dawn iċ-ċelloli jistgħu jinżammu f'37°C, se jikbru aktar bil-mod.
Linji ta 'ċelluli derivati minn annimali ta' demm kiesaħ (bħal anfibji, ħut tal-ilma kiesaħ) jistgħu jittolleraw firxa wiesgħa ta 'temperatura ta' 15 °C sa 26 °C.
Ħin tal-post: Frar-01-2023