Il-kontaminazzjoni tal-kulturi taċ-ċelluli tista 'faċilment issir l-aktar problema komuni fil-laboratorji tal-kultura taċ-ċelluli, xi kultant tikkawża konsegwenzi serji ħafna.Il-kontaminanti tal-kultura taċ-ċelluli jistgħu jinqasmu f'żewġ kategoriji, kontaminanti kimiċi bħal impuritajiet medji, serum u ilma, endotossini, plastiċizzanti u deterġenti, u kontaminanti bijoloġiċi bħal batterji, forom, ħmira, viruses, infezzjoni trasversali mikoplasmi.Kontaminat minn linji taċ-ċelluli oħra.Għalkemm huwa impossibbli li tiġi eliminata kompletament il-kontaminazzjoni, il-frekwenza u s-severità tagħha jistgħu jitnaqqsu billi wieħed jifhem sewwa s-sors tagħha u ssegwi tekniki asettiċi tajbin.
1.Din it-taqsima tiddeskrivi t-tipi ewlenin ta 'kontaminazzjoni bijoloġika:
Kontaminazzjoni batterika
Kontaminazzjoni tal-moffa u tal-virus
Kontaminazzjoni mikoplażma
Kontaminazzjoni tal-ħmira
1.1 Kontaminazzjoni batterika
Il-batterji huma grupp kbir ta 'mikro-organiżmi b'ċellula waħda kullimkien.Normalment huma biss ftit mikroni fid-dijametru u jistgħu jiġu f'varjetà ta 'forom, minn sferi għal vireg u spirali.Minħabba l-ubikwità, id-daqs u r-rata ta 'tkabbir mgħaġġel tagħhom, il-batterji, flimkien mal-ħmira u l-moffa, huma l-aktar kontaminanti bijoloġiċi komuni fil-kultura taċ-ċelluli.
1.1.1 Sejbien ta 'Kontaminazzjoni Batterjali
Il-kontaminazzjoni batterika tinstab faċilment permezz ta' spezzjoni viżwali tal-kultura fi żmien ftit jiem minn meta tiġi infettata;
Il-kulturi infettati ġeneralment jidhru mċajpra (jiġifieri, imċajpra), kultant b'film irqiq fuq il-wiċċ.
Qtar f'daqqa fil-pH tal-medju tal-kultura huwa wkoll spiss jiltaqgħu magħhom.
Taħt mikroskopju ta 'qawwa baxxa, il-batterji jidhru bħala granuli ċkejkna li jiċċaqalqu bejn iċ-ċelloli, u l-osservazzjoni taħt mikroskopju ta' qawwa għolja tista 'ssolvi l-forom ta' batterji individwali.
1.2 Kontaminazzjoni tal-moffa u l-virus
1.2.1 Kontaminazzjoni tal-Moffa
Il-forom huma mikro-organiżmi ewkarjotiċi tar-renju fungali li jikbru fil-forma ta 'filamenti multiċellulari msejħa hyphae.In-netwerks konnettivi ta 'dawn il-filamenti multiċellulari fihom nuklei ġenetikament identiċi msejħa kolonji jew miċelju.
Simili għall-kontaminazzjoni tal-ħmira, il-pH tal-kultura jibqa 'stabbli matul il-fażi inizjali tal-kontaminazzjoni u mbagħad jiżdied malajr hekk kif il-kultura ssir infettata aktar severament u ssir imċajpra.Taħt il-mikroskopju, il-miċelju ġeneralment ikun filamentoż, xi kultant bħala gruppi densi ta 'spori.L-ispori ta 'ħafna forom jistgħu jgħixu f'ambjenti estremament ħarxa u inospitabbli matul il-fażi ta' rieqda tagħhom u huma attivati biss meta jiltaqgħu mal-kundizzjonijiet ta 'tkabbir it-tajba.
1.2.2 Kontaminazzjoni tal-Virus
Il-viruses huma aġenti infettivi mikroskopiċi li jieħdu f'idejhom il-makkinarju taċ-ċellula ospitanti għar-riproduzzjoni.Id-daqs estremament żgħir tagħhom jagħmilha diffiċli biex jinstabu fil-kultura u biex jitneħħew mir-reaġenti użati fil-laboratorji tal-kultura taċ-ċelluli.Peress li l-biċċa l-kbira tal-viruses għandhom rekwiżiti stretti ħafna għall-ospiti tagħhom, ġeneralment ma jaffettwawx ħażin il-kulturi taċ-ċelluli ta 'speċi oħra għajr l-ospitanti.
Madankollu, l-użu ta 'kulturi taċ-ċelluli infettati bil-virus jista' joħloq riskju serju għas-saħħa tal-persunal tal-laboratorju, speċjalment jekk ċelluli umani jew tal-primati jitkabbru fil-laboratorju.
Infezzjoni virali fil-kulturi taċ-ċelluli tista 'tiġi skoperta permezz ta' mikroskopija elettronika, immunostaining b'sett ta 'antikorpi, ELISA, jew PCR bi primers virali xierqa.
1.3 Kontaminazzjoni tal-Mikoplażma
Mycoplasmas huma batterji sempliċi mingħajr ħitan taċ-ċelluli, u huma maħsuba li huma l-iżgħar organiżmi li jirreplikaw lilhom infushom.Minħabba d-daqs estremament żgħir tagħhom (ġeneralment inqas minn 1 mikron), il-mikoplasma hija diffiċli biex tinstab sakemm jilħqu densitajiet estremament għoljin u jikkawżaw li l-kulturi taċ-ċelluli jiddeterjoraw;Sa dakinhar, normalment ma jkun hemm l-ebda sinjal ovvju ta 'infezzjoni.
1.3.1 Sejbien ta' kontaminazzjoni mikoplażma
Xi mikoplażmi li jikbru bil-mod jistgħu jippersistu fil-kulturi mingħajr ma jikkawżaw mewt taċ-ċelluli, iżda jibdlu l-imġieba u l-metaboliżmu taċ-ċelloli ospitanti fil-kulturi.
Infezzjoni kronika mikoplażma tista 'tkun ikkaratterizzata minn rata mnaqqsa ta' proliferazzjoni taċ-ċelluli, tnaqqis fid-densità ta 'saturazzjoni u agglutinazzjoni f'kultura ta' sospensjoni.
Madankollu, l-uniku mod affidabbli biex tiskopri l-kontaminazzjoni tal-mikoplażma huwa li tittestja l-kultura regolarment billi tuża tbajja fluworexxenti (eż., Hoechst 33258), ELISA, PCR, immunostaining, awtoradjografija, jew ittestjar tal-mikrobi.
1.4 Kontaminazzjoni tal-ħmira
Il-ħmira huma ewkarjoti b'ċellula waħda tar-renju fungali, li jvarjaw fid-daqs minn ftit mikroni (ġeneralment) sa 40 mikron (rari).
1.4.1Sejbien ta 'kontaminazzjoni tal-ħmira
Bħal fil-każ tal-kontaminazzjoni batterjali, il-kulturi kkontaminati bil-ħmira jistgħu jsiru mċajpra, speċjalment jekk il-kontaminazzjoni tkun fi stadju avvanzat.Il-pH tal-kulturi kkontaminati bil-ħmira ftit li xejn jinbidel sakemm il-kontaminazzjoni ssir aktar severa, f'liema stadju l-pH normalment jiżdied.Taħt il-mikroskopju, il-ħmira tidher bħala partiċelli ovoid jew sferiċi individwali u tista 'tipproduċi partiċelli iżgħar.
Infezzjoni 2.Cross
Għalkemm mhux komuni daqs il-kontaminazzjoni mikrobjali, il-kontaminazzjoni inkroċjata estensiva ta 'ħafna linji taċ-ċelluli b'HeLa u linji ta' ċelluli oħra li qed jikbru malajr hija problema definita b'mod ċar b'konsegwenzi serji.Ikseb linji taċ-ċelluli minn banek taċ-ċelluli ta 'fama, iċċekkja regolarment il-karatteristiċi tal-linji taċ-ċelluli, u uża tekniki asettiċi tajbin.Dawn il-prattiki jgħinuk tevita l-kontaminazzjoni inkroċjata.Il-marki tas-swaba tad-DNA, il-karjotipi u l-isotipi jistgħu jikkonfermaw jekk hemmx kontaminazzjoni inkroċjata fil-kultura taċ-ċelluli tiegħek.
Għalkemm mhux komuni daqs il-kontaminazzjoni mikrobjali, il-kontaminazzjoni inkroċjata estensiva ta 'ħafna linji taċ-ċelluli b'HeLa u linji ta' ċelluli oħra li qed jikbru malajr hija problema definita b'mod ċar b'konsegwenzi serji.Ikseb linji taċ-ċelluli minn banek taċ-ċelluli ta 'fama, iċċekkja regolarment il-karatteristiċi tal-linji taċ-ċelluli, u uża tekniki asettiċi tajbin.Dawn il-prattiki jgħinuk tevita l-kontaminazzjoni inkroċjata.Il-marki tas-swaba tad-DNA, il-karjotipi u l-isotipi jistgħu jikkonfermaw jekk hemmx kontaminazzjoni inkroċjata fil-kultura taċ-ċelluli tiegħek.
Ħin tal-post: Frar-01-2023